該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時(shí)，檢測(cè)其dsDNA等，結(jié)合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機(jī)制提供了工具。

模型動(dòng)物飼養(yǎng)在武漢大學(xué)人民醫(yī)院動(dòng)物房SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點(diǎn)

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時(shí)針走向設(shè)計(jì)。屏障系統(tǒng)內(nèi)共有大鼠飼養(yǎng)室1間，小鼠飼養(yǎng)室3間，隔離觀察室1間，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機(jī)房和配電室等。

（2）設(shè)計(jì)參數(shù)

室內(nèi)溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對(duì)濕度：40%～70%；換氣次數(shù)：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強(qiáng)梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級(jí)；菌落數(shù)：≤3個(gè)/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動(dòng)物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時(shí)間：12/12h。

（3）通風(fēng)和空調(diào)系統(tǒng)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室采用全新風(fēng)中央空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)。空氣經(jīng)過初、中、三級(jí)過濾器后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境。

（4）照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動(dòng)物飼養(yǎng)室、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備間、隔離觀察室和功能實(shí)驗(yàn)室等安裝有手動(dòng)和自動(dòng)開關(guān)，根據(jù)實(shí)際需要，調(diào)節(jié)控制室內(nèi)照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點(diǎn)和晚上8點(diǎn)開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統(tǒng)

因?yàn)镾PF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和設(shè)施具有特殊要求，人員進(jìn)入后不能隨意出入，而室內(nèi)外的聯(lián)系又十分重要，故室內(nèi)各房間均安裝內(nèi)部電話機(jī)，按照房間順序編排電話號(hào)碼，各室內(nèi)電話可相互連通，并均與監(jiān)控室總機(jī)保持聯(lián)系，保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外信息的及時(shí)溝通。

（6）監(jiān)控系統(tǒng)

對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的出入口、走道、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉(zhuǎn)的攝像機(jī)，能夠及時(shí)了解設(shè)施的運(yùn)行狀態(tài)；也能有效督促實(shí)驗(yàn)人員執(zhí)行科學(xué)的操作規(guī)程，避免人為因素造成室內(nèi)環(huán)境和設(shè)施的污染；并對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間的動(dòng)物狀態(tài)和反應(yīng)進(jìn)行觀察，減少對(duì)動(dòng)物的滋擾。

（7）供水系統(tǒng)

SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水以純凈水為宜。本實(shí)驗(yàn)室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內(nèi)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室，設(shè)置接水槽，為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)用水。要經(jīng)常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當(dāng)比例的84消毒液。

（8）供電系統(tǒng)、警報(bào)系統(tǒng)和消防設(shè)施

SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室要求全天候不間斷供風(fēng)和供電，如果出現(xiàn)故障，不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理，就可能導(dǎo)致環(huán)境設(shè)施的污染、動(dòng)物感染或死亡，造成嚴(yán)重后果。因此應(yīng)對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室使用獨(dú)立穩(wěn)定的供電系統(tǒng)，并配備有應(yīng)急電源。在中央空調(diào)機(jī)房控制室安裝風(fēng)機(jī)故障警報(bào)系統(tǒng)，以便及時(shí)檢修和維護(hù)，保證設(shè)施的安全運(yùn)行。

（9）消毒滅菌設(shè)備

為防止外界物品進(jìn)入SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室時(shí)所攜帶的細(xì)菌污染室內(nèi)環(huán)境和造成動(dòng)物交叉感染，按照不同物品的特性，進(jìn)行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或?qū)Ｓ玫臋C(jī)動(dòng)門真空滅菌器消毒。

（10）動(dòng)物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點(diǎn)。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，配有底盤和食槽，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有充足的采食和活動(dòng)空間，同時(shí)也保證室內(nèi)環(huán)境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時(shí)，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術(shù)后的恢復(fù)、生長發(fā)育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產(chǎn)型飼料和維持型飼料必須嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行科學(xué)配制生產(chǎn)。每半年檢測(cè)一次飼料的微生物指標(biāo)和有效營養(yǎng)成分指標(biāo)，保證飼料的質(zhì)量。

Western blot顯示，該大鼠無法正常表達(dá)功能性完整的瘦素受體蛋白。

1. 肥胖 瘦素受體敲除大鼠（Lepr-/-）與野生大鼠相比攝食量和體重都顯著增加，1月齡時(shí)雄性瘦素受體敲除大鼠比野生大鼠體重增加60%，8月齡時(shí)雌性瘦素受體敲除大鼠比雄性大鼠更加肥胖，比同齡同性別野生大鼠體重增加了160%（圖2）

圖2 瘦素受體敲除大鼠體重增加 圖A，8月齡瘦素受體敲除大鼠和野生大鼠的比較； B和C, 1-8月齡雄性和雌性瘦素受體敲除大鼠和野生大鼠的體重曲線。 2. 雄性瘦素敲除大鼠空腹血糖和隨機(jī)血糖值增加

雄性瘦素敲除大鼠的空腹血糖從4月齡開始至8月齡都顯著高于野生大鼠，隨機(jī)血糖值從2月齡開始至8月齡顯著高于野生大鼠，其中4月齡時(shí)是野生大鼠血糖值的1.64倍，這種現(xiàn)象在雌鼠中沒有觀測(cè)到。

圖3 瘦素受體敲除大鼠和野生大鼠空腹及隨機(jī)血糖的比較A和B，瘦素受體敲除大鼠雄鼠和雌鼠空腹血糖與野生大鼠的比較；C和D，瘦素受體敲除大鼠雄鼠和雌鼠隨機(jī)血糖與野生大鼠的比較 3 胰島素抵抗和高胰島素血癥 瘦素敲除大鼠在2月齡，4月齡和8月齡的糖耐受實(shí)驗(yàn)顯示明顯的胰島素抵抗和高胰島素血癥，隨著月齡的增加胰島素抵抗更加顯著（圖4）。

圖4 2，4，8月齡瘦素受體敲除大鼠和野生大鼠的糖耐受曲線及葡萄糖刺激下的胰島素曲線A和B, 2，4，8月齡瘦素受體敲除大鼠和野生大鼠的糖耐受曲線C和D, 2，4，8月齡瘦素受體敲除大鼠和野生大鼠的胰島素曲線5.4 瘦素受體敲除大鼠胰島細(xì)胞增生及組織的脂肪沉積 病理切片觀察到瘦素受體敲除大鼠有增生的胰島，肝臟細(xì)胞中有脂肪沉積和空泡化的現(xiàn)象（圖5）。

圖5 病理觀察瘦素受體敲除大鼠的胰腺和肝臟組織 4 瘦素敲除大鼠出現(xiàn)高脂血癥 2，4，8月齡瘦素敲除大鼠外周血血生化分析顯示，甘油三酯，總膽固醇，高密度膽固醇都顯著高于同齡野生大鼠， 8月齡時(shí)低密度膽固醇也顯著升高。表1， 2，4，8月齡瘦素敲除大鼠和野生大鼠的血生化分析

CHO, 總膽固醇; TG, 甘油三酯; HDL, 高密度脂蛋白; LDL, 低密度脂蛋白.* P<0.05, **P<0.01, *** P<0.001

利用CRISPR/Cas9技術(shù)制備瘦素受體（Leptin receptor）基因敲除大鼠，獲得一個(gè)在瘦素受體所在基因組上從90043bp to 90341bp位置缺失 298-bp堿基，并插入了4個(gè)堿基，在瘦素受體基因序列上產(chǎn)生了終止密碼子TGA，在蛋白水平上來看共缺失了997個(gè)氨基酸。Western blot顯示，該大鼠無法正常表達(dá)功能性完整的瘦素受體蛋白。

糖尿病是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征，臨床上以高血糖為主要特點(diǎn)，典型病例可出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦等表現(xiàn)，即“三多一少”癥狀，糖尿病(血糖)一旦控制不好會(huì)引發(fā)并發(fā)癥，導(dǎo)致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無法治愈。糖尿病(Diabetes)分1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病及其他特殊類型的糖尿病。在糖尿病患者中，2型糖尿病所占的比例約為95%。2型糖尿病原名叫成人發(fā)病型糖尿病，多在35～40歲之后發(fā)病。

2 型糖尿病有更強(qiáng)的遺傳性和環(huán)境因素，并呈顯著的異質(zhì)性。目前認(rèn)為發(fā)病原因是胰島素抵抗(主要表現(xiàn)為高胰島素血癥，葡萄糖利用率降低)和胰島素分泌不足的合并存在，其表現(xiàn)是不均一的，有的以胰島素抵抗為主伴有胰島素分泌不足，有的則是以胰島素分泌不足伴有或不伴有胰島素抵抗。胰島素是人體胰腺B細(xì)胞分泌的身體內(nèi)唯一的降血糖激素。胰島素抵抗是指體內(nèi)周圍組織對(duì)胰島素的敏感性降低，外周組織如肌肉、脂肪對(duì)胰島素促進(jìn)葡萄糖的吸收、轉(zhuǎn)化、利用發(fā)生了抵抗。臨床觀察胰島素抵抗普遍存在于2型糖尿病中，高達(dá)90%左右。2型糖尿病可導(dǎo)致感染、心臟病變、腦血管病變、腎功能衰竭、雙目失明、下肢壞疽等而成為致死致殘的主要原因。糖尿病高滲綜合癥是糖尿病的嚴(yán)重急性并發(fā)癥，初始階段可表現(xiàn)為多尿、多飲、倦怠乏力、反應(yīng)遲鈍等。隨著機(jī)體失水量的增加病情急劇發(fā)展，出現(xiàn)嗜睡、定向障礙、癲癇樣抽搐，偏癱等類似腦卒中的癥狀，甚至昏迷。