到目前為止，已經(jīng)報道有2種非人靈長類動物（恒河猴、食蟹猴）和4種嚙齒類動物（大鼠、小鼠、田鼠、沙鼠），雪貂、家貓以及雞、鴨等禽類可以作為H5N1禽流感病毒動物模型用于實驗研究。低致病性H5N1禽流感病毒可以通過適應(yīng)建立鼠肺適應(yīng)株感染小鼠建立小鼠模型。非人靈長類動物通過鼻腔吸入較難感染，通常需要借助輔助器材進行定位感染，動物感染后體征變化不顯著，肺組織出現(xiàn)局灶性病變。

前期研究顯示雪貂的受體分布情況與人極為接近，呼吸氣道長，上下呼吸道分腔明顯是流感病毒研究最為理想的動物模型，缺點是雪貂受物種特異性限制缺乏相應(yīng)的檢測試劑。小鼠對多種流感病毒敏感，一直被選擇作為流感病毒研究的動物模型，不僅有完備的檢測試劑，還有相應(yīng)的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機制方面的研究。早期研究曾在多種非人靈長類動物中（非洲綠猴、Pata猴、豬尾猴、食蟹猴）檢測到血清抗體陽性，并推測猴群感染病毒參與了流感大流行。研究發(fā)現(xiàn)非人靈長類動物感染禽流感病毒后的臨床改變、病理變化、抗原分布都與人類存在一定差異，研究結(jié)果顯示其對流感病毒敏感性較雪貂、小鼠低。至今沒有直接證據(jù)表明非人靈長類動物的受體分布情況與人接近。恒河猴中研究局部肺組織損傷機制不僅與巨噬細胞有關(guān)，在研究抗補體機制中還應(yīng)考慮PAMP的參與，NF-κB 等炎癥信號途徑的作用，這些研究在非人靈長類中受到一定限制，目前小鼠可以提供多方面抗補體機制研究。

受體比較

1) 人呼吸道上皮受體分布情況：α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體主要分布在鼻粘膜上皮細胞, α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體分布在鼻旁竇、咽、氣管、細支氣管上皮上。在終端呼吸性細支氣管上皮細胞也表達α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體。α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體出現(xiàn)在呼吸細支氣管與肺泡交界的無纖毛立方細支氣管細胞上，部分肺泡壁細胞表達這種受體，這種細胞為肺泡Ⅱ型細胞。病人感染H5N1禽流感病毒后，病毒主要分布在肺泡Ⅱ型細胞內(nèi)。

2) 雪貂除了氣管中極少數(shù)杯狀細胞既表達α-2，3SA受體又α-2，6SA受體，其上下呼吸道受體分布與人極為相似，小鼠多表達α-2，3SA受體，α-2，6SA受體較少，曾局限的認為小鼠較適合用于α-2，3SA受體結(jié)合的病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對小鼠的致病力和復制能力。

3)有研究顯示通過體外實驗證實非洲綠猴上皮細胞與人類流感病毒和禽類流感病毒都有較好的結(jié)合能力，與人類上皮細胞的結(jié)合能力接近。缺乏實驗證據(jù)顯示其受體與人類受體分布相似度。

6.2感染途徑比較

1) 小鼠、雪貂通過輕微麻醉后，以吸入式方式感染，感染方式與人極為接近。

2) 恒河猴、綠猴、食蟹猴等需要以環(huán)甲膜穿刺、支氣管鏡定位感染等方式進行感染，感染途徑與自然感染途徑差別較大，感染效果通常會出現(xiàn)肺組織局域性灶狀感染，與吸入性感染方式產(chǎn)生的病變程度、范圍存在一定差別。

感染后癥狀

1) 部分禽流感病毒在猴上皮細胞中復制受限或者發(fā)生不同程度的衰減。例如禽來源的H2N2病毒不能感染猴，H5N1高致病性禽流感病毒需要以高出雪貂感染劑量103倍的劑量感染猴，仍不致死，僅產(chǎn)生一過性體溫升高。

2) 幾乎所有禽流感病毒都能夠在雪貂中成功復制，并產(chǎn)生臨床可觀察的改變，例如體溫升高、體重下降、噴嚏、流涕、精神萎靡甚至死亡。

3)H5N1禽流感病毒感染小鼠后出現(xiàn)嚴重的肺炎，除呼吸道以外還在腦、脾、肝等組織中發(fā)現(xiàn)病毒抗原，并在腦組織中出病理改變，猴感染后在呼吸道以外的組織中未發(fā)現(xiàn)病毒抗原。

CRP基因敲除小鼠和人CRP轉(zhuǎn)基因小鼠在賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司模式動物研究中心完成，該中心具有符合國際標準的動物模型制備相關(guān)完備監(jiān)督管理制度。動物的繁殖及感染模型評估在中國疾控中心動物中心完成，所有操作在SFP級別下遵守二級生物安全管理規(guī)定進行，實驗動物尸體實行無害化處理，對生態(tài)環(huán)境無影響。

1. 雪貂氣溶膠感染后臨床表現(xiàn)及上呼吸道復制情況

在接種H9N2病毒的所有雪貂中均未觀察到臨床癥狀，H9N2病毒不能通過飛沫從感染的雪貂傳播給空氣接觸組的雪貂，空氣接觸組雪貂鼻試子和咽拭子均未檢測到病毒。

2. 雪貂模型感染后血清特異性抗體產(chǎn)生情況

接觸雪貂的恢復期血清（21d.p.e.）對于病毒特異性抗體是陰性的，說明這種病毒不能通過空氣進行傳播（表1）。

雪貂呼吸道解剖結(jié)構(gòu)上下呼吸道分腔明顯，受體分布與人極為接近，是迄今為止最為敏感的流感病毒感染動物模型。它對人流感病毒高度易感，病毒不經(jīng)適應(yīng)即能使雪貂致病，并易傳播給雪貂和人。在自然條件下，雪貂一般也是通過呼吸道吸入病毒的方式感染流感病毒，其感染后的發(fā)病過程和機體反應(yīng)也與人體相似。雪貂除對人流感病毒高度易感外，對禽流感、豬流感病毒也十分敏感，感染后出現(xiàn)典型癥狀。

分子生物學研究顯示，這是由于雪貂的呼吸道上皮細胞表面存在人流感病毒特異性受體α2,6糖鍵連接的唾液酸，而其肺泡上皮細胞表面也存在著禽流感病毒特異性受體α2,3糖鍵連接的唾液酸。

相較于其他流感動物模型，雪貂的優(yōu)勢為 ：（1）雪貂感染流感病毒后的癥狀、發(fā)病機制和免疫反應(yīng)與人類極為相似。（2）人甲、乙型流感病毒均可自然感染雪貂，這為在完全控制的群體內(nèi)觀察流感的傳播規(guī)律和流感病毒抗原性的漂移和轉(zhuǎn)變提供了可能。（3）雪貂的氣管較長，這樣就使其上、下呼吸道區(qū)室化，有利于研究流感病毒對呼吸道不同區(qū)域的效應(yīng)差異。（4）雪貂作為動物模型比嚙齒類大，易于監(jiān)測其體溫、脈搏和呼吸頻率。（5）在小型動物中，雪貂是唯一感染甲型流感病毒后自然出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)的動物模型。

通過血凝抑制實驗（HI），對若干6～10月齡的成年去勢雪貂進行篩選，選出對于目前流行的流感病毒血清抗體均為陰性者。

在感染之前，將雪貂飼養(yǎng)在生物安全3級實驗室中（ABSL3）中并監(jiān)測5到7天以測量其體溫。將皮下可植入溫度應(yīng)答器（BioMedic Data Systems;http://www.bmds.com）置于每個雪貂中，用于記錄雪貂每天的體溫。

雪貂經(jīng)過輕度麻醉后滴鼻感染107EID50A/Brambling/Beijing/16/2012（H9N2）病毒（Genbank：KC464595.1、KC464596.1、KC464597.1、KC464598.1、KC464599.1、KC464600.1、KC464601.1、KC464602.1)。

感染后24小時，對應(yīng)每只感染的雪貂在被傳播籠內(nèi)放入一只未攻毒的雪貂，研究病毒的傳播力。為了避免操作者操作過程中人為的污染，每次取樣時都要先處理被傳播組雪貂，同時還要保證用過的器械消毒后才可用于下只雪貂。每天記錄雪貂的臨床癥狀并監(jiān)測體溫。感染后1，3，5，7，9d采集感染組和被傳播組雪貂的鼻拭子和咽試子，置于1mlPBS中，接種雞胚，測定鼻拭子和咽拭子中的病毒滴度。感染后第14天收集感染組和被傳播組雪貂的血清，HI實驗測定血清轉(zhuǎn)化情況。

流感病毒是嚴重威脅人類健康的一種病原體，它能導致流感疫情甚至世界大流行，流感在各個年齡階段的人群中都可能爆發(fā)而引起急性發(fā)熱性呼吸道疾病。流感病毒為單股負鏈RNA病毒，屬于正黏液病毒科，呈球形或絲狀，直徑80-120nm。病毒外層為兩種不同糖蛋白構(gòu)成的輻射狀突起，即血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)。根據(jù)HA和NA抗原的不同，又可分為許多亞型，H可分為16個亞型，N有9個亞型(N1～N9)。在所有的流感亞型中，H9N2備受關(guān)注，H9N2分布區(qū)域廣泛，偶爾還可以感染人。值得注意的是，H5N1、H7N9、及H10N8亞型禽流感的6個內(nèi)部基因均來自H9N2亞型病毒。文獻報道H9N2亞型不經(jīng)過適應(yīng)即可在小鼠體內(nèi)進行有效復制。另外，有文獻報道，H9N2病毒在獲得2009年甲型H1N1病毒內(nèi)部基因后即可在雪貂群體間通過氣溶膠傳播。

一般感染H9N2的潛伏期為2～4d，平均3d。臨床多為急性起病，早期表現(xiàn)類似一般流感,主要為發(fā)熱，體溫大多持續(xù)在39℃以上，熱程1～7d,一般為3～4d,可伴有流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、頭痛和周身不適，少數(shù)患者有惡心、腹痛、腹瀉、稀水樣便等癥狀。重癥患者病情發(fā)展迅速，可出現(xiàn)肺炎、急性呼吸窘迫綜合征、肺出血、胸腔積液、全血細胞減少、腎功能衰竭、敗血癥、休克及Reye綜合征等多種并發(fā)癥。感染H9N2預后良好。